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Registro Completo |
Biblioteca(s): |
Embrapa Gado de Corte. |
Data corrente: |
06/02/2018 |
Data da última atualização: |
06/02/2018 |
Tipo da produção científica: |
Orientação de Tese de Pós-Graduação |
Autoria: |
GONÇALVES, A. N. D. |
Afiliação: |
Aline Najara Domingos Gonçalves. |
Título: |
Desenvolvimento de um ensaio imunoenzimático (ELISA) pra diagnóstico de Linfadenite caseosa em ovinos e caprinos. |
Ano de publicação: |
2017 |
Fonte/Imprenta: |
Campo Grande, MS: Programa de Pós-graduação em ciência Animal/Universidade Federal de Mato Grosso do Sul, 2017. |
Páginas: |
67 f. |
Idioma: |
Português |
Notas: |
Tese apresentada à Universidade Federal de Mato Grosso do Sul, como requisito à obtenção do título de Doutora em Ciência Animal. Área de concentração: Saúde Animal. Orientadora: Grácia Maria Soares Rosinha - Embrapa Gado de Corte |
Conteúdo: |
A Linfadenite Caseosa (LC) é uma doença infectocontagiosa, causada pela bactéria Corynebacterium pseudotuberculosis e que acomete ovinos e caprinos. Esta doença é caracterizada por lesões purulentas e caseosas nos gânglios linfáticos e, ocasionalmente, pulmões, baço, rins e fígado. O diagnóstico da LC, normalmente, é baseado em sinais clínicos, no entanto, o teste padrão ouro é o isolamento microbiológico, realizado a partir do material purulento dos abcessos. Faz-se necessário um método que seja capaz de diagnosticar animais doentes, com presença ou não de abcessos externos. Neste contexto, visto os esforços para identificar e controlar a doença, objetivou-se, neste estudo, avaliar o potencial da proteína XA1 recombinante (XA1r) de C. pseudotuberculosis como candidata a compor um teste sorológico do tipo ELISA indireto, para o diagnóstico de linfadenite caseosa em ovinos e caprinos. A sequência do gene xa1, que codifica a porção hidrofílica da proteína XA1, foi selecionada com o auxílio do programa Protean (DNASTAR®). Esta sequência e a construção do plasmídeo de expressão gênica foram sinteticamente confeccionadas pela empresa de biotecnologia Genone Biotechnologies. O gene xa1 foi clonado em plasmídeo de expressão em procariotos pET-47b(+). O plasmídeo pet47Bxa1 foi introduzido em célula quimicamente competente de E. coli Rosetta-Gami e realizada a expressão gênica XA1r foi purificada por cromatografia de afinidade, em resina metálica com a coluna de agarose níquel, dialisada em PBS, quantificada pelo método de Lowry e armazenada a -20ºC. Posteriormente, um teste de ELISA indireto foi padronizado com o uso desta proteína como antígeno sistemático (n= 23), assintomáticos (n= 10) e histórico de LC (n= 10). O banco formado com soros de caprinos foi composto por soros positivos (n=29), negativos (n=19), soros de animais de um rebanho com histórico de LC (n= 15) e outros soros de caprinos com sinais clínicos da doença (n= 29), totalizando 92 soros. O ponto de corte foi feito por meio da curva ROC. O teste de ELISA indireto foi capaz de discriminar animais positivos e negativos, com sensibilidade de 90,9% e especificidade de 72,2%. Foram identificados cinco animais como falso-positivos e três foram considerados falso-negativos. Quando testados os animais dos três grupos - testes assintomáticos, histórico de LC e controle sistemático -, 90,7% foi considerado positivo para LC. O teste de ELISA indireto para diagnóstico de LC em caprinos apresentou sensibilidade de 96,6% e especificidade de 67,2%. O teste de ELISA apresentou um animal falso-negativo e seis falso-positivos. A associação do teste de ELISA indireto, proposto a exames clínicos, foi capaz de diagnosticar como positivos 96,55% dos animais que possuíam sinal clínico da doença, mostrando assim, o potencial da proteína XA1r no reconhecimento de anticorpos contra C. pseudotuberculosis. Os resultados demonstram a potencialidade da proteína XA1r, quando utilizada como antígeno em teste ELISA indireto. Deste modo, este imunoensaio poderá ser utilizado para o diagnóstico de ovinos e caprinos com LC, auxiliando no controle da doença. MenosA Linfadenite Caseosa (LC) é uma doença infectocontagiosa, causada pela bactéria Corynebacterium pseudotuberculosis e que acomete ovinos e caprinos. Esta doença é caracterizada por lesões purulentas e caseosas nos gânglios linfáticos e, ocasionalmente, pulmões, baço, rins e fígado. O diagnóstico da LC, normalmente, é baseado em sinais clínicos, no entanto, o teste padrão ouro é o isolamento microbiológico, realizado a partir do material purulento dos abcessos. Faz-se necessário um método que seja capaz de diagnosticar animais doentes, com presença ou não de abcessos externos. Neste contexto, visto os esforços para identificar e controlar a doença, objetivou-se, neste estudo, avaliar o potencial da proteína XA1 recombinante (XA1r) de C. pseudotuberculosis como candidata a compor um teste sorológico do tipo ELISA indireto, para o diagnóstico de linfadenite caseosa em ovinos e caprinos. A sequência do gene xa1, que codifica a porção hidrofílica da proteína XA1, foi selecionada com o auxílio do programa Protean (DNASTAR®). Esta sequência e a construção do plasmídeo de expressão gênica foram sinteticamente confeccionadas pela empresa de biotecnologia Genone Biotechnologies. O gene xa1 foi clonado em plasmídeo de expressão em procariotos pET-47b(+). O plasmídeo pet47Bxa1 foi introduzido em célula quimicamente competente de E. coli Rosetta-Gami e realizada a expressão gênica XA1r foi purificada por cromatografia de afinidade, em resina metálica com a coluna de agarose níquel, diali... Mostrar Tudo |
Palavras-Chave: |
Lymphadenitis Caseosa. |
Thesagro: |
Corynebacterium Pseudotuberculosis. |
Thesaurus Nal: |
Enzyme-linked immunosorbent assay; Goats; Sheep. |
Categoria do assunto: |
-- |
URL: |
https://ainfo.cnptia.embrapa.br/digital/bitstream/item/172260/1/Desenvolvimento-de-um-ensaio-imunoenzimatico-Elisa.pdf
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Marc: |
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Embrapa Gado de Corte (CNPGC) |
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2. | | CATÃO, A. M. L.; RODRIGUES, J.; MARRETO, R. N.; MASCARIN, G. M.; FERNANDES, E. K. K.; HUMBER, R. A.; LUZ, C. Optimization of granular formulations of Metarhizium humberi microsclerotia with humectants. Journal of Basic Microbiology, v. 61, n. 9, p. 808-813, 2021.Tipo: Artigo em Periódico Indexado | Circulação/Nível: B - 1 |
Biblioteca(s): Embrapa Meio Ambiente. |
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3. | | D'ALESSANDRO, C. P.; JONES, L. R.; HUMBER, R. A.; LÓPEZ LASTRA, C. C.; SOSA-GOMEZ, D. R. Characterization and phylogeny of Isaria spp. strains (Ascomycota: Hypocreales) using ITS1-5.8S-ITS2 and elongation factor 1-alpha sequences. Journal of Basic Microbiology, Weinheim, v. 53, n. 12, p. 1-11, Nov. 2013.Tipo: Artigo em Periódico Indexado | Circulação/Nível: B - 1 |
Biblioteca(s): Embrapa Soja. |
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5. | | HUMBER, R. A.; TIGANO, M. S. Global perspectives on the discovery, isolation, preservation, and exploitation of entomopathogenic fungal germplasm. In: INTERNATIONAL COLLOQUIUM ON INVERTEBRATE PATHOLOGY AND MICROBIAL CONTROL, 8.; INTERNATIONAL CONFERENCE ON BACILLUS THURINGIENSIS 6.; ANNUAL MEETING OF THE SIP, 35., 2002, Foz do Iguassu. Proceedings... Londrina: Embrapa Soja: Embrapa Recursos Genéticos e Biotecnologia: UEL: SIP, 2002. p. 196-200. (Embrapa Soja. Documentos, 184; Embrapa Recursos Genéticos e Biotecnologia, 74). Symposium (Cross-Division 2) Microbial Germplasm Repositories: the legacy, problem, the future.Biblioteca(s): Embrapa Recursos Genéticos e Biotecnologia. |
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6. | | LOPES, R. B.; SOUZA, D. A. de; ROCHA, L. F. N.; MONTALVA, C.; LUZ, C.; HUMBER, R. A.; FARIA, M. Metarhizium alvesii sp. nov.: a new member of the Metarhizium anisopliae species complex. Journal of Invertebrate Pathology, v. 151, p. 165-168, 2018.Tipo: Artigo em Periódico Indexado | Circulação/Nível: A - 1 |
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9. | | MAGALHÃES, B. P.; ST. LEGER, R. J.; HUMBER, R. A.; ALLEE, L. L.; SHIELDS, E. J.; ROBERTS, D. W. Nuclear events during germination and appressorial formation of the entomopathogenic fungus Zoophthora radicans (Zygomycetes: entomophthorales). Journal of Invertebrate Pathology, New York, v. 57, n. 1, p. 43-49, Jan. 1991.Biblioteca(s): Embrapa Arroz e Feijão. |
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11. | | MAGALHAES, B. P.; WAYNE, R.; HUMBER, R. A.; SHIELDS, E. J.; ROBERTS, D. W. Papel do calcio na formacao de apressorio pelo fungo entomopatogenico Zoophthora radicans. In: SIMPOSIO DE CONTROLE BIOLOGICO, 2., 1990, Brasilia. Resumos... Brasilia: EMBRAPA-CENARGEN, 1990. p.123-124. (EMBRAPA-CENARGEN. Documentos, 13).Biblioteca(s): Embrapa Arroz e Feijão. |
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12. | | MARTINEZ, J. M.; RODRIGUES, J.; MARRETO, R. N.; MASCARIN, G. M.; FERNANDES, E. K. K.; HUMBER, R. A.; LUZ, C. Efficacy of focal applications of a mycoinsecticide to control Aedes aegypti in Central Brazil. Applied Microbiology and Biotechnology, v. 105, n. 23, p. 8702-8714, 2021.Tipo: Artigo em Periódico Indexado | Circulação/Nível: A - 1 |
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13. | | MASCARIN, G. M.; GUARÍN-MOLINA, J. H.; ARTHURS, S. P.; HUMBER, R. A.; MORAL, R. de A.; DEMÉTRIO, C. G. B.; DELALIBERA JUNIOR, I. Seasonal prevalence of the insect pathogenic fungus Colletotrichum nymphaeae in Brazilian citrus groves under different chemical pesticide regimes. Fungal Ecology, v. 22, p. 43-51, Aug. 2016.Tipo: Artigo em Periódico Indexado | Circulação/Nível: A - 2 |
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14. | | MONTALVA, C.; COLLIER, K.; ROCHA, L. F. N.; INGLIS, P. W.; LOPES, R. B.; LUZ, C.; HUMBER, R. A. A natural fungal infection of a sylvatic cockroach with Metarhizium blattodeae sp. nov., a member of the M. flavoviride species complex. Fungal Biology, v. 120, n. 5, p. 655-665, 2016.Tipo: Artigo em Periódico Indexado | Circulação/Nível: A - 2 |
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16. | | RODRIGUES, J.; CATÃO, A. M. L.; SANTOS, A. S. dos; PAIXÃO, F. R. S.; SANTOS, T. R.; MARTINEZ, J. M.; MARRETO, R. N.; MASCARIN, G. M.; FERNANDES, E. K. K.; HUMBER, R. A.; LUZ, C. Relative humidity impacts development and activity against Aedes aegypti adults by granular formulations of Metarhizium humberi microsclerotia. Applied Microbiology And Biotechnology, v. 105, n. 7, p. 2725-2736, 2021.Tipo: Artigo em Periódico Indexado | Circulação/Nível: A - 1 |
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19. | | SOSA-GOMEZ, D. R.; HUMBER, R. A.; HODGE, K. T.; BINNECK, E.; SILVA-BRANDÃO, K. L. da. Variability of the mitochondrial SSU rDNA of Nomuraea species and other entomopathogenic fungi from Hypocreales. Mycopathologia, Netherlands, v. 167, n. 3, p. 145-154, mar. 2009.Tipo: Artigo em Periódico Indexado | Circulação/Nível: B - 1 |
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